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细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst33342/PI)图片
产品货号:
GL0322
中文名称:
细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst33342/PI)
英文名称:
Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种采用Hoechst33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的PI染色能够观察DNA直方图上凋亡细胞的亚G1峰,但只能代表G0/G1期发生凋亡,无法观察S期和G2期发生的细胞凋亡,而且细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。Hoechst33342可以穿透细胞膜,进入正常细胞和凋亡细胞与DNA结合,能在紫外线下显示蓝色荧光,而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强;PI不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色;而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,PI可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。


bjbalb Hoechst 33342/PI双染后可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来,在二元直方图上正常细胞对Hoechst33342具有拒染性,呈弱蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst33342+/PI+);凋亡细胞对Hoechst33342具有嗜染性,呈强蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst33342++/PI+);坏死细胞对PI具有嗜染性,呈弱蓝色荧光+强红色荧光;该试剂盒亦可用荧光显微镜进行观察,检测细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。




组分规格保存
试剂(A):Cell Stain Buffer(2×)100mLRT
试剂(B):Hoechst33342 Stain0.5mL-20℃,避光
试剂(C):PI Stain0.5mL-20℃,避光

保存:-20℃,避光,有效期1年。


  • 胰蛋白酶消化液、PBS
  • 流式细胞仪或荧光显微镜、细胞计数板



  • 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。
  • 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
  • Heochst 33342与细胞孵育的时间不宜过长,一般控制在20min以内,太长容易引起Heochst 33342的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光与蓝色荧光的比例改变。
  • 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测。
  • PI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



  • 细胞样品的制备:
    • 贴壁细胞:
      • 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。
      • 用胰蛋白酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。
      • 收集上述细胞悬液到离心管内,4℃ 1000g离心3~5min,使细胞沉到管底,小心吸取上清并丢弃,可留大约50μL培养液,以免吸走细胞。
      • 加入约1mL提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5mL无菌离心管,4℃ 1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。
      • 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μL PBS,以免吸走细胞,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
    • 悬浮细胞:
      • 4℃ 1000g离心3~5min,使细胞沉到管底,小心吸取上清并丢弃,可留大约50μL培养液,以免吸走细胞。
      • 加入约1mL提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5mL无菌离心管,4℃ 1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。
      • 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μL PBS,以免吸走细胞,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
  • 配制Cell Stain Buffer工作液:取适量Cell Stain Buffer(2×)与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合,即为Cell Stain Buffer工作液,4℃保存备用。
  • Hoechst 33342/PI染色:
    • 一步法:取上述收集好的0.1~1×106细胞,加入0.9mL Cell Stain Buffer工作液,重悬细胞沉淀。加入5μL Hoechst 33342 Stain和5μL PI Stain,轻轻混匀,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。
    • 两步法:
      • 加入5μL Hoechst 33342 Stain,置于37℃水浴,孵育5~15min。
      • 置于冰水中冷却后,4℃ 1000g离心3~5min,使细胞沉到管底,弃上层染色液。
      • 加入0.9mL Cell Stain Buffer工作液,重悬细胞沉淀。
      • 加入5μL PI Stain,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。
  • 检测与分析:用流式细胞仪在激发波长400~500nm检测蓝色荧光,在大于630nm处检测红色荧光,同时检测光散射情况,采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析;如果使用荧光显微镜检测,检测前4℃ 1000g离心3~5min沉淀细胞,用PBS洗涤一次,再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测,亦可不收集细胞,弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),冰浴或4℃染色20~30min,染色后PBS洗涤1次,再在荧光显微镜下观察。



在蓝色荧光对红色荧光的散点图上,正常细胞呈低蓝光/低红光,凋亡细胞呈高蓝光/低红光,坏死细胞呈低蓝光/高红光。
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